一、实验目的：
    掌握简单染色的方法和步骤，并用油浸镜观察细菌形态。
二、实验材料
    普通光学显微镜、香柏油、二甲苯、擦镜纸、实验一所得的细菌菌落。
三、实验步骤：
1．简单染色法
    细菌个体微小，且较为透明。因此需借助染料使其着色，以便于在显微镜下观察。细菌简单染色是用一种染液一次着染菌体的方法。其原理是细菌在中性环境中一般带负电荷，所以当采用碱性染料进行染色时，这类染料解离后，染料离子带正电，故使菌体着色。具体步骤如下：
（1） 涂片：先滴一滴生理盐水于干净的载玻片上，然后按无菌操作方法用接种环勾取少许菌种与玻片上的水混合均匀，涂成一均匀的薄层。
（2） 干燥：将涂片于室温中自然干燥。
（3） 固定：待涂片干燥后，手持玻片，涂面向上，在酒精灯火焰上通过2-3次，以玻片放在手背上刚觉烫手为度。不能将玻片放在火上烤，否则细菌形态毁坏。固定的目的是，通过固定使细菌贴附在玻片上，并将细菌杀死，菌体蛋白变性，易着色。
（4） 染色：滴一滴结晶紫染液于菌膜上，染色一分钟左右，用清水在玻片上端轻轻冲洗掉染液，至冲洗水无色或浅色即可。注意不能直接冲洗染色部分，以免将菌体冲掉。
（5） 干燥：用吸水纸将染好的涂片吸干。
（6） 油镜观察：用油镜对涂片进行镜检，观察菌体形态、大小，同时绘出图来。（注意油镜使用后的清洗，擦三遍）。
   由|沪杏显微镜 http://www.shhx17.com/shhx17/com_pro.asp?sid=17&bid=13 整理提供

例如，在可见光照射下，用数值口径1.25的油镜（一般油镜的镜口角半数的正弦为0.81），能分辨出物体两点间的最短距离D＝0.55/（2 x 1.25)＝0. 22μm而且数值口径为0.65的高倍镜，能分辨出的最短距离D=0.55/（2 x 0.65)=0.42μm 。即两点间的最小距离如果小于0.4μm，在高倍镜下即混为一点，不可辨晰，而在油镜下则清晰可见。

  使用某一物镜时，应配合一定数值口径的聚光镜。一般以聚光镜的数值口径大于或等于物镜的数值口径为宜，否则影响物镜的性能。
由此可见，显微镜的性能不只是决定于总放大率。一般来说，显微镜的总放大率应以物镜数值口径的500--1000倍为宜，这个范围内的放大率叫有效放大率。例如，用NA 1.25（100 x）的物镜，其有效放大率为1250，超过此数叫无效放大率，虽用15x的目镜可放大1500倍，但对分辨率是没有任何帮助的。

更多显微镜技术、使用、故障解决方案，请随时关注上海沪杏光学技术部技术文章更新，上海沪杏光学愿与广大用户共同探讨显微镜的发展与更新。
        更多显微镜技术资料可点击：http://www.shhx17.com/shhx17/news.asp  
上海沪杏光学仪器有限公司主要生产和销售金相显微镜、偏光显微镜、体视显微镜、检测显微镜、维氏硬度计等光学设备。 销售部热线： 021-20227929  18801751626 


上一篇： 显微镜油镜的使用
下一篇： 上海沪杏光学暗视野显微镜的工作原理