切片法:石蜡切片法、火棉胶切片法、冰冻切片法等。
石蜡切片法:石蜡切片法在研究动植物的细胞、组织、胚胎以及形态等方面是最为理想的制片方法。
从取材开始,到制成切片标本为止,其间必须经过以下各主要步骤:
一、取材 二、固定 三、洗涤 四、脱水 五、透明 六、透入与包埋 七、切片 八、贴片 九、染色 十、封藏
1.透明:透明也是渐次由低浓度至高浓度。材料先在纯酒精和二甲苯各半的混合液浸15—30分钟,再转入纯二甲苯中透明(至透明为止),一般15—30分钟。
透明的注意事项
• 使用透明剂时,要随时盖紧盖子,以免空气中水分进入;
• 更换透明剂,动作要迅速;
• 材料周围出现白色雾状,应退回纯酒精中重新脱水。
2.透蜡:材料自二甲苯中取出后,先移入二甲苯和石蜡等量的混合液中约30分钟,然后进入纯石蜡中约40—60分钟,再换纯石蜡一次约40—60分钟。
透蜡的注意事项
• 动物材料常用的石蜡熔点为52-56ºC;植物材料为54-60ºC。
• 透蜡温度要恒定,不可忽高忽低;
3.包埋:从温箱中取出盛放纯石蜡的蜡杯,倒入包埋用的纸盒中,取出存放材料的蜡杯,用温镊子夹取材料平放于纸盒底部,使之排列整齐。将纸盒两侧的把手提起,慢慢地平放在面盆的水面,待石蜡的表面凝固,将纸盒慢慢浸入水中,待石蜡完全凝固(约30分钟)后即可取出备用。
包埋的注意事项
• 包埋前应先把必需的用具(恒温箱、温台、纸盒)准备好。
• 包埋用的镊子要先放在温箱中预热。
4.切片
1. 切片前的准备工作
(1)石蜡块的固着:先将蜡块用刀片切成方形或长方形,组织四周留下2—3mm宽的石蜡。点燃酒精灯,然后用烤热蜡铲放在台木和蜡块之间,利用蜡铲的温度熔化两者的蜡,把蜡块粘附在台木上。
(2)整修:用单面刀片将蜡块四周修整平行。
2.切片的方法
(1) 将已固定和修好的石蜡块台木装在切片机的夹物台上。
(2) 将护刀盖推至打开位置。
(3) 摇动快速进退手轮使石蜡块与刀口贴近,但不超过刀口。注意:在转动手轮时,应保证机头在红、绿线之间移动。
(4) 调整石蜡块与刀口之间的角度与位置,刀片与石蜡切片约成15-30度。
(5) 调整厚度调节器到所需的切片厚度,一般4-10微米。
(6) 一切调整好后就可以切片。此时右手摇动大手轮,左手持毛笔将蜡带提起,摇转速度以每分钟40-50转为宜。
(7)切成的蜡带到20-30厘米时,右手用另一支毛笔将蜡带挑起,平放在蜡带盘上。注意:靠刀面的一面较光滑朝下
5. 贴片
1.取一清洁的载玻片,滴一小滴粘片剂于玻片中央,用手指涂抹均匀。
2.滴1-2滴蒸馏水于已涂粘片剂的载玻片上。
3.用刀片割一小段蜡带,放在水面上。注意蜡片光面贴于玻片上。并使之偏玻片的一端,另一端贴标签。
4.把玻片标本置于展片台上(温度保持在40-45ºC),直到蜡片伸展摊平。
5.展片后把玻片标本编好记号,放在平盘上。
6. 染色:染色的一般方法;由于要染的切片包在石蜡之中,而所用的染色剂又常常为水溶液,因此在染色之前,必须再度复 水,石蜡切片在二甲苯中溶去石蜡,经过各级酒精,下降至水,经染色后需再脱水,上升到二甲苯透明然后封藏。